Puffer herstellen < Chemie < Naturwiss. < Vorhilfe
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Hallo zusammen,
wahrscheinlich ist die Frage total blöd, aber ich habe keine Ahnung wie ich vorgehen muss.
Und zwar soll ich verschiedene Puffer herstellen, weiß aber irgendwie nicht wirklich wie viel ich von den einzelnen Stoffen zugeben soll.
100 ml Lysepuffer (25mM HEPES pH 7,5; 300mM NaCl; 10%Glycerin; 5mM Imidazol)
Wie viel brauche ich von den einzelnen Stoffen? Also wie berechne ich das?
LG Isa
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Hallo Isabelle90,
> Hallo zusammen,
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> wahrscheinlich ist die Frage total blöd, aber ich habe
> keine Ahnung wie ich vorgehen muss.
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> Und zwar soll ich verschiedene Puffer herstellen, weiß
> aber irgendwie nicht wirklich wie viel ich von den
> einzelnen Stoffen zugeben soll.
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> 100 ml Lysepuffer (25mM HEPES pH 7,5; 300mM NaCl;
> 10%Glycerin; 5mM Imidazol)
>
> Wie viel brauche ich von den einzelnen Stoffen? Also wie
> berechne ich das?
>
> LG Isa
Wie ich nach kurzer Recherche finden konnte sind sowohl HEPES als auch Imidazol Puffersubstanzen.
Könntest Du uns vielleicht den vollständigen Passus aus Deinem Versuchsskript schreiben?
Welchen pH soll die Lösung haben?
Man findet viele relevante Seiten beim googlen.
LG, Martinius
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Danke zunächst einmal für deine Antwort!
> Hallo Isabelle90,
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> > Hallo zusammen,
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> > wahrscheinlich ist die Frage total blöd, aber ich habe
> > keine Ahnung wie ich vorgehen muss.
> >
> > Und zwar soll ich verschiedene Puffer herstellen, weiß
> > aber irgendwie nicht wirklich wie viel ich von den
> > einzelnen Stoffen zugeben soll.
> >
> > 100 ml Lysepuffer (25mM HEPES pH 7,5; 300mM NaCl;
> > 10%Glycerin; 5mM Imidazol)
> >
> > Wie viel brauche ich von den einzelnen Stoffen? Also wie
> > berechne ich das?
> >
> > LG Isa
>
>
> Wie ich nach kurzer Recherche finden konnte sind sowohl
> HEPES als auch Imidazol Puffersubstanzen.
>
> Könntest Du uns vielleicht den vollständigen Passus aus
> Deinem Versuchsskript schreiben?
"100 ml Lysepuffer (25mM HEPES pH 7,5; 300mM NaCl; 10%Glycerin; 5mM Imidazol)"
ist exakt das, was in meinem Skript steht. Mehr steht da nicht zu, also weder pH Wert noch irgendwas anderes.
Das einzige was weiterhin dabei steht, sind zwei weitere Puffer
100 ml Waschpuffer (25mM HEPES pH 7,5; 300mM NaCl; 10%Glycerin; 20mM Imidazol)
50 ml Elutionspuffer (25mM HEPES pH 7,5; 300mM NaCl; 10%Glycerin; 300mM Imidazol)
Aber ebenfalls keine weiteren Angaben.
Für mich fällt das irgendwie vom Himmel und ich hab beim besten Willen keine Ahnung wie ich die Puffer herstellen soll...
Aber es beruhigt mich gerade, dass die Anweisungen anscheinend auch nicht "vernünftig" formuliert sind und es also nicht nur an mir liegt...!
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> Welchen pH soll die Lösung haben?
>
> Man findet viele relevante Seiten beim googlen.
>
> LG, Martinius
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Hallo Isabelle90,
In Deinem Skript steht:
"100 ml Lysepuffer (25mM HEPES pH 7,5; 300mM NaCl; 10%Glycerin; 5mM Imidazol)"
Ich beschränke mich einmal auf den HEPES-Puffer.
![[]](/images/popup.gif) http://de.wikipedia.org/wiki/HEPES
Ich bin mir nun nicht ganz sicher, ob der Skript-Autor eine 25-milli-molare Lösung fordert, oder dass die 100 ml Lysepuffer 25 milli-Mol an Hepes enthalten sollen.
Wikipedia schreibt, die Einheit M sei veraltet.
(Es läuft letztlich auf einen Konzentrationsunterschied vom Faktor 10 hinaus - bei allerdings gleichem pH.)
Wikipedia gibt auch 3 verschiedene pKs-Werte an - für drei verschiedene Temperaturen - ich nehme einmal den für 25°C: pKs = 7,48 .
Die Protolyse der Sulfonsäure HEPES ist:
$HEPES-H + H_2O [mm] \rightleftharpoons HEPES^{-}+H_3O^{+}$
[/mm]
[mm] $Ks\; =\; \frac{[HEPES^{-}]*[H_3O^{+}]}{[HEPES-H]}$ [/mm] und also: [mm] $[H_3O^{+}]\;=\; Ks*\frac{[HEPES-H]}{[HEPES^{-}]}$
[/mm]
und: [mm] $pH\;=\;pKs+lg \left( \frac{[HEPES^{-}]}{[HEPES-H]}\right)$
[/mm]
Nun wird gefordert, dass der pH = 7,5 sein möge. Aus diesen Angaben kann man dann das Verhältnis von Sulfonsäure und deprotonierter Sulfonsäure errechnen:
$7,5 [mm] \;=\;7,48+lg \left( \frac{[HEPES^{-}]}{[HEPES-H]}\right)$
[/mm]
[mm] $0,02\;=\;lg \left( \frac{[HEPES^{-}]}{[HEPES-H]}\right)$
[/mm]
[mm] $10^{0,02}\;\approx\;1,047129\;=\; \frac{[HEPES^{-}]}{[HEPES-H]}$ [/mm] und daraus: [mm] $n(HEPES^{-})\;=\;1,047129*n(HEPES-H)$
[/mm]
und: [mm] $n(HEPES^{-})+n(HEPES-H)\;=\;25*10^{-3}\;mol$ [/mm] daraus: [mm] $n(HEPES^{-})\;=\;25*10^{-3}mol-n(HEPES-H)$ [/mm]
[mm] $1,047129*n(HEPES-H)\;=\;25*10^{-3}mol-n(HEPES-H)$
[/mm]
[mm] $1,047129*n(HEPES-H)+n(HEPES-H)\;=\;25*10^{-3}mol$
[/mm]
[mm] $n(HEPES-H)\;=\;\frac{25*10^{-3}mol}{2,047129}\;\approx\;12,212\;mmol$
[/mm]
daraus: [mm] $n(HEPES^{-})\;=\; 12,787772\;mmol$
[/mm]
LG, Martinius
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| Status: |
(Mitteilung) Reaktion unnötig  | | Datum: | 11:56 Mo 07.10.2013 | | Autor: | Isabelle90 |
Vielen Dank für die Hilfe!
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